Multiplex Real-Time PCR Targeting the RNase P RNA Gene for Detection and Identification of Candida Species in Blood

Hemos desarrollado un método de PCR multiplex en tiempo real de un solo tubo para la detección de las ocho especies de Candida más comunes que causan septicemia: Candida albicans, C. dubliniensis, C. famata, C. glabrata, C. guilliermondii, C. krusei, C . parapsilosis y C. tropicalis. El método objetivos desarrolló el gen de ARN de la RNasa P RPR1. Las secuencias de este gen se determinaron para siete de las especies de Candida y mostraron sorprendentemente grande variación de la secuencia. C. glabrata se encontró que tenía un gen que era gen cinco veces más largos que los de las otras especies, y la similitud de secuencia de nucleótidos entre C. krusei y C. albicans fue tan baja como 55%. El multiplex PCR contenía tres sondas que permitieron la detección específica de C. albicans, C. glabrata y C. krusei y una cuarta sonda que permitió la detección general de las especies restantes. El método fue capaz de detectar de 1 a 10 copias del genoma cuando el límite de detección fue probado varias veces para las cuatro especies de C. albicans, C. glabrata, C. krusei y C. guilliermondii. No hay diferencia significativa en el límite de detección se observó cuando el formato multiplex se comparó con una sola especie PCR, es decir, dos cebadores y una sonda. El método detecta ocho especies de Candida clínicamente relevantes y no reaccionó con otras especies de Candida no probados o el ADN humano. El ensayo se aplicó a 20 muestras de sangre de nueve pacientes y mostró una sensibilidad similar a la de la cultura.