Establishment and application of real-time quantitative PCR for diagnosing invasive aspergillosis via the blood in hematological patients: targeting a specific sequence of Aspergillus 28S-ITS2.

ANTECEDENTES:

La aspergilosis invasiva (IA) es una causa importante de morbilidad y mortalidad en los individuos inmunocomprometidos. Este estudio se realizó para identificar una secuencia de ADN diana deseable para el diagnóstico de la aspergilosis usando la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (qPCR).

MÉTODOS:

Se extrajo ADN genómico a partir de Aspergillus, Candida, y especies de bacterias, y qPCR se aplicó a validar un ribosomal 28S secuencia de ADN-ITS2 parcial. Muestras de sangre anticoagulada con ácido etilendiaminotetraacético se obtuvieron de 72 pacientes hematológicos febriles, mientras que el ADN total fue aislado de plasma y sangre entera para el Aspergillus qPCR. Los resultados fueron analizados utilizando una curva ROC. Todos los casos fueron evaluados utilizando la Organización revisada Europea para la Investigación y Tratamiento del Cáncer / Invasiva Infecciones por hongos Cooperative Group y el Instituto Nacional de Alergias y Enfermedades Infecciosas Micosis Grupo de Estudio (EORTC / MSG) Criterios de diagnóstico.

RESULTADOS:

El uso de qPCR arrojó resultados positivos para 15 especies de Aspergillus, pero los resultados negativos de las especies de Candida, las cepas bacterianas, y el ADN humano. El límite de detección fue una copia por microlitro de ADN. La sensibilidad analítica y especificidad fueron seis copias de ADN y 100%, respectivamente. La curva estándar mostró que qPCR era fiable para la detección de Aspergillus y que significativamente más copias de ADN se obtuvieron a partir de sangre entera que de plasma (P <0,001). Con un valor de corte de ≥ 25 copias / l, la sensibilidad y especificidad de diagnóstico para la IA utilizando 28S-ITS2 qPCR fueron 90,9% y 73,4%, respectivamente.

CONCLUSIONES:

El uso de qPCR con sangre entera para detectar y verificar la secuencia de 28S-ITS2 es una forma específica y útil para diagnosticar IA.